《动脉粥样硬化》 三、弹性蛋白的提取

提取方法较多，各有优缺点。1969年Bornstein和Ross先用5mol/L盐酸胍抽提，再用胶原酶水解其他非弹性蛋白组分，最后还原二硫键，分离提取弹性蛋白。具体方法如下：

1．将动脉血管壁洗净，小心除去附着结缔组织。

2．将血管壁组织浸于4℃ 50%的吡啶液，破碎组织，3kr/min离心15min。

3．取沉淀用蒸馏水洗涤3次，真空干燥后研成粉末。

4．将粉末悬浮于2mol/L NaCl,4℃搅拌24h，3kr/min离心20min，弃上清，沉淀用蒸馏水洗3次。

5．将沉淀用无水乙醇脱脂20min，用氯仿-甲醇（2：1）处理20min，再用乙醚冲洗干燥，3kr/min离心20min，真空干燥沉渣。

6．干燥的沉淀物用5倍处理液（0.5mol/LCaCl2、10.05mol/l Tris-HClpH7.5、2%胶原酶）洗涤，3kr/min离心20min。

7．将沉淀移入带塞的瓶中，加含0.5mol/L盐酸胍、0.1mol/l Tris-HClpH8.5、0.05mol/L二硫赤藓糖醇，2.0mol/L EDTA液4℃过夜。

8．3kr/min离心20min，沉淀用蒸馏水洗涤2次。

9，沉淀物加入处理液（6mol/L尿素、0.1%SDS、0.05mol/L二硫赤藓糖醇、0.05mol/l Tris-HCl pH7.7），通过氮氧真空过夜，3kr/min离心20min。

10．沉淀再真空干燥，即为弹性蛋白。